Методичні вказівки та контрольні завдання з біологічної хімії для студентів фармацевтичного факультету заочна форма навчання



Сторінка9/13
Дата конвертації05.11.2016
Розмір1.46 Mb.
1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   13

Практична робота



Дослід 1. Вплив жовчі на активність ліпази.

Принцип методу. Активність ліпази оцінюють за утворенням жирних кислот у результаті гідролізу жиру. Їх кількість визначають титруванням лугом у присутності фенолфталеїну. Гідроліз жирів найзручніше спостерігати на прикладі витяжки з підшлункової залози (джерело ліпази) і молока як субстрату, жир якого знаходиться в емульгованому стані і швидко розщеплюється на гліцерин і жирні кислоти. Якщо в пробу долити жовч, то ліпаза активується і гідроліз жиру протікає швидше.

Матеріальне забезпечення: панкреатин, молоко кип’ячене і попередньо розведене 1:1, жовч, 0,5 % спиртовий розчин фенолфталеїну, 0,05 н NaOH, водяна баня або термостат, мікробюретки, піпетки.

Хід роботи. У дві пробірки або колбочки наливають по 10 мл молока та по 0,5 мл панкреатину. В одну пробірку доливають 1 мл води, а в другу – 1 мл жовчі. Вміст пробірок добре перемішують. З кожної пробірки відбирають по 1 мл суміші в інші пробірки, додають 1-2 краплі 0,5 % розчину фенолфталеїну і відразу ж титрують 0,05 н розчином натрію гідроксиду до появи слаборожевого забарвлення, яке не зникає впродовж 30 секунд. Потім ці пробірки із залишком суміші вміщують у водяну баню або термостат при 37°С. Через кожні 10-15 хвилин з них відбирають по 1 мл суміші і проводять титрування, як і попереднього разу. Роблять 4-5 таких визначень. Результати виражають в мл розчину лугу, який затрачається на титрування.

Отримані дані вносять в таблицю і будують криву, відкладаючи по осі абсцис час у хв, а по осі ординат – кількість NаОН в мл, який пішов на титрування.




Умови досліду

0 хв

15 хв

30 хв

45 хв

60 хв

Кількість NаОН, мл

Ліпаза, активована жовчю
















Ліпаза без жовчі
















Значення для фармації та клініки. Перетравлювання ліпідів відбувається, в основному, в кишці під дією активної панкреатичної ліпази, тому що в шлунковому соку ліпаза малоактивна. Ліпіди мають бути емульговані. Головним емульгатором ліпідів є жовч, при додаванні якої ліпаза активується і гідроліз жирів відбувається з більшою швидкістю. Оскільки ліпаза є основним ензимом для перетравлення ліпідів, зміни її активності можуть свідчити про порушення певних ланок ліпідного обміну. Дефіцит панкреатичної ліпази викликає панкреатогенну стеаторею, яку спостерігають при хронічному панкреатиті, спадковій гіпоплазії pancreas, спадковому чи набутому дефіциті панкреатичної ліпази, а також при муковісцидозі. Вміст жовчних пігментів у калі при таких станах супроводжується зниженням вмісту вільних жирних кислот і значним приростом нерозщеплених жирів. Причиною порушення емульгування, травлення і всмоктування ліпідів і жиророзчинних вітамінів можуть також бути захворювання печінки, жовчного міхура або жовчних шляхів (жовчокам’яна хвороба).
Дослід 2. Кількісне визначення кетонових тіл у сечі.

Принцип методу. Див. попередній дослід.

Матеріальне забезпечення: див. попередній дослід.

Хід роботи. Беруть 8 пробірок. У всі, крім першої, наливають по 1мл дистильованої води. У першу та другу пробірки додають по 1 мл сечі хворого на цукровий діабет. Таким чином, у першій пробірці сеча не розведена, а в другій розведена у двічі. Після перемішування з другої пробірки відбирають 1 мл суміші і переносять у третю пробірку, з третьої в четверту і т. д. З останньої пробірки 1 мл виливають для урівнювання об’єму з іншими пробірками. Таким чином, сеча в пробірках буде розведеною у 2, 4, 8 (і т. д.) разів.

Потім у кожну пробірку додають по 8 крапель 50 % розчину амонію сульфату для збільшення густини розчинів, по 8 крапель ацетатної кислоти (концентрованої) та натрію нітропрусиду. Вміст пробірок перемішують і в кожну з них обережно по стінках, починаючи з останньої пробірки, нашаровують по 1 мл концентрованого аміаку (реактив відбирати обережно лише за допомогою гумової груші, працюючи з ним під витяжною шафою). Спостерігаючи за пробірками, позначають ту з них, у якій при максимальному розведенні сечі впродовж 3-4 хв ще помітне фіолетове кільце на межі рідин. Звернути увагу, що для успішного проведення досліду аміак необхідно нашаровувати обережно, по стінках. Акцентувати увагу на термін отримання фіолетового кільця.



Розрахунок проводять за формулою:

Х = 0,85 А 15, де

Х – концентрація ацетону в сечі, мг/добу; 0,85 – емпіричне число; А – розведення сечі; 15 – перерахунок на добову сечу 1500 мл.

Після проведення розрахунків зробити висновок.



Значення для фармації та клініки. У здорової людини в крові вміст кетонових тіл – 1,3-185 мкмоль/л (1,5-20 мг/л), з сечею виділяється 20-40 мг на добу. Це переважно ацетоацетатна і -оксимасляна кислоти. Різке зростання концентрації кетонових тіл супроводжується порушенням кислотно-основного стану і розвитком метаболічного кетоацидозу, що є небезпечним, в першу чергу, для нормального функціонування клітин головного мозку.

Збільшення кількості кетонових тіл у крові (кетонемію) і появу їх у сечі (кетонурію) спостерігають при цукровому діабеті, тиреотоксикозі, ураженні печінки, важких інтоксикаціях, голодуванні. Зниження кількості кетонових тіл не має клінічного значення.




Контроль виконання лабораторної роботи
Тести

1. У хворих на цукровий діабет спостерігається підвищення вмісту вільних жирних кислот (НЕЖК). Причиною цього може бути:

А. Накопичення в цитозолі пальмітоїл-КоА

В. Активація утилізації кетонових тіл

С. Активація синтезу аполіпопротеїнів А1, А2, А4

Д. Зниження активності фосфатидилхолінхолестеринацилтрансферази плазми крові

Е. Підвищення активності тригліцеридліпази
2. При лабораторному обстеженні крові хворого, взятої натще, виявлено, що сироватка має білуватий колір, вміст загальних ліпідів – 20 г/л, холестеролу – 9 мМ/л. Після центрифугування сироватки на поверхні утворюється біла плівка, що дозволяє припустити збільшення в крові хіломікронів. Зниження активності якого ферменту може спричинити таке явище?

А. Ліпази підшлункової залози

В. Панкреатичних фосфоліпаз

С. Лецитинхолестеринацилтрансферази

Д. Ліпази жирової тканини

Е. Ліпопротеїнліпази крові


3. Після прийому жирної їжі у хворого з’являються нудота та печія, має місце стеаторея. Причиною такого стану може бути:

А. Недостатність амілази

В. Підвищення виділення ліпази

С. Порушення синтезу фосфоліпази

Д. Порушення синтезу трипсину

Е. Недостатність жовчних кислот


4. Жири є необхідним енергетичним матеріалом для організму. Який основний шлях перетворення жирних кислот у мітохондріях клітини?

А. Відновлення

В. Декарбоксилування

С. -Окиснення

Д. -Окиснення

Е. -Окиснення


5. При цукровому діабеті та голодуванні в крові збільшується вміст ацетонових тіл, які використовуються як енергетичний матеріал. Назвіть речовину, з якої вони синтезуються?

А. Цитрат

В. Ацетил-КоА

С. Сукциніл-КоА

Д. -Кетоглутарат

Е. Малат
6. При обстеженні хворого виявлено підвищений вміст ліпопротеїнів низької щільності в сироватці крові. Яке захворювання можна очікувати у цього хворого?

А. Запалення легень

В. Атеросклероз

С. Гастрит

Д. Гострий панкреатит

Е. Ураження нирок
7. Скарги та об’єктивні дані дозволяють припустити наявність у хворого запального процесу у жовчному міхурі, порушення колоїдних властивостей жовчі, ймовірність утворення жовчних каменів. Що головним чином може спричинити їх утворення?

А. Урати

В. Оксалати

С. Хлориди

Д. Фосфати

Е. Холестерол



1   ...   5   6   7   8   9   10   11   12   13


База даних захищена авторським правом ©lecture.in.ua 2016
звернутися до адміністрації

    Головна сторінка